GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》：新增产气荚膜梭状芽孢杆菌的测定方法

2023年3月17日经国家市场监督管理总局（国家标准化管理委员会）批准发布GB/T 5750-2023《生活饮用水标准检验方法》系列标准，代替实施16年之久的GB/T 5750-2006 《生活饮用水标准检验方法》。

新标准将于2023年10月1日起正式实施。 GB/T 5750-2023标准历时5年，经过了3轮意见征求，有280+单位参与研制与验证，有超过500名行业专家参与的GB/T 5750修订工作，最终大功告成。

本次修订微生物指标主要内容：新增肠球菌和产气荚膜梭状芽孢杆菌两个检测指标、3种检测方法和增加菌落总数酶底物法新方法。

其中产气荚膜梭状芽孢杆菌是厌氧菌，标准中要求使用厌氧培养装置在36℃下培养，如何选择合适的厌氧培养装置达到好的培养效果就显得尤为重要。

目前市场上常见的有三类设备或手段：

一、厌氧培养箱（厌氧工作站）

厌氧培养箱（工作站）是偏重于厌氧环境下的操作。在厌氧环境下氧气浓度＜1%，不能做到氧浓度为0%；并且厌氧培养箱（工作站）只能做厌氧环境培养，不能在一个箱体内同时实现不同的气体环境；厌氧培养箱的控温效果不如普通培养箱，同时由于厌氧培养箱（工作站）普遍体积较大，使用中耗气量特别大，操作和维护也比较繁琐，不适合小批量的实验需求。

二、产气袋

在没有购置仪器时的替代方案，使用产气袋进行厌氧菌、微需氧菌培养，优点是体积小，使用方便灵活，临时性、应急性较好。产气袋不足之处是，要达到厌氧环境所需时间较长，大概在40-60分钟左右，存在时间过长、培养效果差、阳性率低的普遍现象，没有质量保障体系，不能保证厌氧环境，这也是误检和漏检的重要原因之一。

另外，产气袋会产生大量实验室垃圾，且单次使用成本较高，更适合应急或外出采集标本时使用。

三、智能厌氧微需氧培养系统（厌氧罐法）

此类设备偏重于厌氧环境下的培养。工作原理是通过真空抽排置换使培养罐内快速达到所需要的气体培养环境，此方法具有良好的操控性与重复性。可在几分钟内使培养罐内达到厌氧环境、微需氧环境，也可以根据需求任意调节培养罐内的氧气浓度；更加简单化、智能化。主要有几个特点：

(1)灵活性强：可连接不同容量的培养罐、每个培养罐可提供不同的培养环境。并可根据标本量的多少相应增加或减少罐体，不会出现超负荷和利用率低的情况。

(2)制备气体环境速度快：短时间内达到所需的气体环境，厌氧环境3分钟，微需氧环境仅需1分钟。

(3)使用成本低：耗气量特别少，后期使用成本非常低，也避免经常更换培养气体导致的麻烦。

(4)有质量保障体系：设备主机在将培养罐内气体环境制备成所需的气体环境过程中，主机会对培养罐做密封检测，保证培养罐的密封培养效果；培养罐与主机脱开后，仍可全程监控培养罐内的氧气浓度，如有漏气报警提示。

     三个培养方法对比表：

四、HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统

华端生物研发生产的HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统适用于厌氧气体环境下的培养，该系统根据真空置换抽排方法，把罐内气体更换为气瓶内的气体，从而创造您所希望的培养条件。HD-AN系列智能厌氧微需氧培养系统可以做厌氧气体环境的培养、微需氧气体环境的培养，还具有自定义设定氧气浓度的气体环境培养。食品安全风险监测中微生物的生长环境不同，要求的气体环境不同；微需氧菌的生长环境一般在氧浓度4%-6%的条件下生长较好，比如幽门螺旋杆菌在4%的氧浓度条件下长得最好、空肠弯曲杆菌在5%的氧浓度条件下长得最好、嗜血杆菌适合在12%的氧浓度环境中生长。华端生物的厌氧、微需氧培养系统的氧气浓度调节功能最宽泛，调节范围0.1%-18%，调节精度最高，氧浓度调节步进最高为0.1%。这就满足了不同厌氧微生物的生长气体环境。

 华端生物的厌氧、微需氧培养系统具有质量保障功能  有了质量检测功能培养罐内的气体质量才有可靠性。当培养罐与主机系统脱开放入37℃孵育箱进行培养时，如何能保证培养罐不漏气？如何能保证培养气体环境质量？这就要靠主机的质量检测功能了以及无线氧浓度实时监测功能。

(1)检测培养罐与主机的连接是否完好。这样可以保证主机系统各个元器件工作正常；连接的培养罐也正常。

(2)检测输入气体压力是否符合要求。这样可以保证培养罐在达到气体环境时，罐内既不会带正压、也不会带负压。

(3)检测罐体在低气压状态下是否有泄漏。这样可以保证罐体没有任何泄漏。

(4)检测罐盖在近大气压状态下是否有泄漏。这样可以保证罐盖绝对密封。

(5)检测催化剂（钯颗粒）活性是否符合要求。在执行厌氧程序时，主机系统要对催化剂活性进行检测，有活性的催化剂才能把培养罐中剩余的0.16%氧气消耗掉。从而达到100%的厌氧环境。

只要有任何一个质量检测不通过，系统就会停止执行程序，显示错误信息，从而保证培养罐内的气体环境质量与培养需求。

6.使用培养罐进行培养具有很多的优点

(1)每一个培养罐可以有独立的气体环境，不同的培养罐可以有不同的气体环境。

(2)每一个培养罐是独立的空间，不同性质的样本可以放在不同的罐体内，避免交叉污染。

(3)不同规格的培养罐，可以放置不同数量的培养样本，还可以放置不同规格的培养样本；随着培养样本数量的多少，随时增减培养罐的数量。

(4)培养罐使用的是PMMA材料，高光洁度，清晰透明，罐体与罐盖透明便于使用者在培养过程中随时观察培养样本的培养状况，不必打开培养罐观察培养效果。

(5)罐体与罐盖抗震抗冲击，气密性好；罐盖凹型槽设计与高质量O型橡胶圈确保罐体与罐盖紧密结合，有效避免泄漏。

(6)培养罐体积小，重量轻，密封性好，便于携带；可用于短期菌株保藏，还可做长途运输样本。

使用该仪器设备后，可以有效提高微生物室的工作效率，保证食品安全风险微生物诊断的准确性，避免漏检和误检，所以开展厌氧菌实验室培养检测项目是极为必要的。

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